冷冻切片须知 - 新鲜未固定组织与固定组织的冷冻切片

本文观点取自南京军区南京总院病理科周晓军与马恒辉的《如何提高冷冻切片的技术水平》

冷冻切片是一种组织不经过脱水、透明处理，不需石蜡包埋的制片方法[ 1 - 3 ]。冷冻切片分为直接冷冻切片法和明胶冷冻切片法[ 4 ]。前者根据组织的制冷方法不同有半导体制冷切片法、甲醇制冷切片法、二氧化碳制冷切片法和低温恒冷箱冷冻切片法。目前，比较常用的方法是低温恒冷箱冷冻切片法。为了提高冷冻切片的技术水平，本文就新鲜未固定组织与固定组织的冷冻切片的一些问题进行交流讨论。

新鲜未固定组织的冷冻切片

组织作冷冻切片最好新鲜，标本尽可能快速冷冻可以避免产生冷冻的人为改变。合适的冷冻技术所使用的冷冻剂包括：液氮( - 190 ℃) ；异戊烷(在液氮中冷却可达- 150 ℃) ；干冰( - 70 ℃)；二氧化碳气体( - 70 ℃) ；气雾状喷雾制冷剂( - 50 ℃) 。

最好的冷冻切片往往是从冷冻较快的组织获得，冷冻剂的最佳选择是异戊烷和液氮。使用液氮的问题在于组织周围易产生空泡，类似绝缘物一样，阻止快速均匀冷却组织，导致组织冷冻人为改变，给病理医师的诊断带来困难，这一点对肌肉活检标本来说特别明显。

液氮和异戊烷可以联合使用，速冻的方法是：在保温瓶中准备液氮约200 ml，在小烧杯中准备异戊烷约50 ml，将盛有异戊烷的烧杯置于液氮中，预冷至无气雾。注意两种物质不能相混。准备一个导热性能好的金属底托预冷，放少量 OCT，置于- 20 ℃低温恒冷箱切片机内，待底托上的 OCT 开始冻结时，将取好的组织块放置于上。用长镊子夹住底托，组织朝上，迅速浸入异戊烷中，速冻20～30s，即可取出。可以在室温中稍许放置1 min左右，待组织标本升温至- 20 ℃，便可开始切片。为防止组织破裂，减少冷冻的人为改变，可以事先将组织在滑石粉上轻轻碾平。

固体二氧化碳简称干冰，也可用来冷冻组织块。这一方法并不经济，因为干冰在储备阶段容易化为气体。操作时须戴上手套取出干冰，对着冷冻夹头上用包埋剂(如 OCT)包埋的组织，待组织周围的包埋剂发白时，即可移去干冰，防止组织冷冻过头而影响切片。关于二氧化碳收集，用一个二氧化碳汽缸储备即可获得，通过调节一个常规的冷冻切片机，其组织夹头带有气体或二氧化碳的循环箱，达到组织块冷冻的目的。

气雾状喷雾制冷剂在冷冻小块组织比较常用。提供该类制冷剂的厂家较多，产品便于储藏，易于购得。主要的问题在于因该制冷剂含有化学成分，故在释放降解的时候有可能会引起环境保护方面的问题。比如，技术人员在切片时喷雾操作不当而不小心被动吸入制冷剂。

展开全文

固定组织的冷冻切片

一般来说，新鲜组织冷冻切片适合于大多数实验室的诊断需要。但是，由于新鲜组织有时容易引起某些易变化成分的扩散，这一情况在切片时比较明显。因为切片时摩擦组织产生热量，会引起组织的临时轻度融化。虽然这一情况对诊断影响不大，但是，有可能影响诸如酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性。为了防止水解酶和其他一些组织抗原扩散，需要预先固定组织，使其能够局限[ 1 ]。

具体方法：固定新鲜组织于甲醛钙，4 ℃，18 h，流水冲洗，或蒸馏水短时过一下。若组织较少，容易破碎，如肠镜活检组织，吸水纸吸干。组织放入蔗糖胶液中4 ℃, 18 h。极小组织可以酌情缩短时间。固定组织块于组织托上方。蔗糖胶的配方：阿拉伯胶2 g，蔗糖60 g，蒸馏水200 ml，4 ℃保存。

参考文献：

[ 1 ] Bancroft J D. Theory and practice of histological techniques[M].London: Churchill Livingstone, 2008: 98 - 104.

[ 2 ] Carson F L.Histotechnology. A self-instructional text[M]. Chicago: American Society of Clinical Pathologists Press, 2009: 64 - 5.

[ 3 ] Prophet E B. Armed forces institute of pathology. Laboratory methods in histotechnology[M]. Washington DC: ARP, 1992: 67 - 70.

[ 4 ] 王伯沄，李玉松，黄高昇等. 病理学技术[M]. 北京:人民卫生出版社, 2000: 88 - 9.

内容来自网络，转载出自于传递更多信息之目的，版权和荣誉归原作者所有。如有侵权请联系我们妥善处理。

返回搜狐，查看更多